El papel del daño de la pared traqueal en el desarrollo de estenosis benigna de las vías respiratorias en conejos

Diferentes grupos experimentales

Veintiocho conejos blancos de Nueva Zelanda, de 4 meses de edad, con un peso de 2,5 a 3,5 kg, de Suzhou Huqiao Biotechnology Co., LTD. (Suzhou, China), se dividieron aleatoriamente en cuatro grupos (7 conejos/grupo): A, B, C y D. Se generaron números aleatorios utilizando la función estándar =ALEATORIO() en Microsoft Excel. Todos los protocolos para este estudio fueron aprobados por el Comité de ética de experimentos con animales del hospital del lago Dushu en la Universidad de animales de Soochow, Suzhou, China (número de permiso de IACUC: 220048), de acuerdo con la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio publicada por los EE. UU. Institutos Nacionales de Salud (NIH Publicación No. 85-23, revisada en 1996). Todos los métodos se realizaron de acuerdo con las pautas y regulaciones de ARRIVE. Empleamos cuatro métodos diferentes de lesión traqueal y los conejos se asignaron de la siguiente manera: grupo A (n = 7), la mucosa traqueal se dañó levemente con un cepillo ordinario mediante traqueoscopia; Grupo B (n = 7), la mucosa traqueal fue severamente dañada por un cepillo de nailon después de la traqueotomía; Grupo C (n = 7), el cartílago traqueal fue dañado por una pinza vascular después de la traqueotomía; y el grupo D (n=7), se lesionó la mucosa traqueal con cepillo de nailon y el cartílago traqueal con pinza vascular. La lesión grave de la mucosa se definió como un aleteo evidente de la mucosa cuando el cepillo se sumergía en solución salina normal después de su uso.

Métodos de lesión traqueal (Tabla 1)

Todos los conejos se mantuvieron en ayunas durante 6 h antes de la cirugía, se anestesiaron por vía intramuscular con 0,1 ml/kg de clorhidrato de xilazina y se colocaron en posición supina sobre la mesa de operaciones. Tras la anestesia, los conejos del grupo A se intubaron hasta la glotis mediante un tubo endotraqueal de 6,5 mm de diámetro interno para evitar la destrucción del broncoscopio por los molares del conejo (fig. 1A). A continuación, se insertó un cepillo regular de 5,5 mm de diámetro en la tráquea a través de un broncoscopio y se raspó circunferencialmente la mucosa traqueal empujando y tirando del cepillo 20 veces. Se rasuró y esterilizó la parte anterior del cuello de cada conejo de los grupos B, C y D. Después de una incisión cutánea en la línea media de la parte anterior del cuello, se expusieron la laringe y la tráquea, con cuidado de no lesionar los músculos esternohioideo y toracotiroideo. Comenzando a 1,5 cm del margen caudal del cartílago cricoides, se cortó la tráquea a lo largo del músculo liso y las fibras elásticas entre los anillos cartilaginosos, y la incisión fue de 2/3 de la circunferencia de la tráquea. En el grupo B, se insertó un cepillo de nailon con un diámetro de 5,5 mm en la tráquea a través de la incisión traqueal y luego se raspó circunferencialmente la mucosa traqueal empujando y tirando del cepillo 20 veces. En el grupo C, se destruyeron 2 cartílagos cricoides a ambos lados de la incisión traqueal con pinzas vasculares. En el grupo D, se raspó la mucosa traqueal por el mismo método que en el grupo B, y se destruyó el cartílago traqueal por el mismo método que en el grupo C. Después de la operación, el cepillo se sumergió en una solución salina normal y se evidenció aleteo de la mucosa. se observó en los grupos B y D. Todos los conejos de los grupos B, C y D fueron examinados en busca de sangrado en la tráquea y, si fue necesario, se aplicó hemostasia mediante compresión con gasa. Después de asegurarse de que los signos vitales de los conejos en todos los grupos eran estables, se suturó la incisión traqueal, el tejido subcutáneo y la piel. Todos los conejos se despertaron por vía intramuscular con 0,1 ml/kg de Luxingning II después de la cirugía.

(A) Intubación traqueal en un conejo; (B) comparación de la incidencia de estenosis. *pag< 0,05, utilizando la prueba exacta de Fisher.

Examen de seguimiento en diferentes momentos.

La formación de estenosis de las vías respiratorias se observó mediante broncoscopia a las 1, 2, 3 y 4 semanas después de la operación. En la semana 4, todos los conejos experimentales se sometieron a broncoscopia, tomografía de coherencia óptica endobronquial (EB-OCT) y tomografía computarizada (TC). Al final del examen, los conejos experimentales fueron sacrificados por embolización de aire y se obtuvieron muestras de laringe y tráquea. Las muestras se fijaron en formalina tamponada al 10 % y algunas muestras traqueales frescas se colocaron en un congelador a -80 °C.

La estenosis de la vía aérea se evaluó mediante TC

Los escaneos de corte fino se realizaron en un escáner Philips de 64 filas y 128 cortes (Philips, Ámsterdam, Países Bajos). Los parámetros de escaneo fueron: espesor de adquisición de capa: 1 mm, voltaje del tubo: 120 kV y corriente del tubo: 78 mA. El diámetro interno de la tráquea se midió en una ventana gruesa (ancho de ventana 500 Hu, nivel de ventana -100 Hu)¹⁹. El grado de estenosis traqueal se evaluó utilizando los siguientes dos índices: el diámetro transversal y el diámetro longitudinal de la tráquea. El antiguo índice (%) se define como²⁰:

donde d1 y d2 son los diámetros transversal y longitudinal del lumen más estrecho, respectivamente, y D1 y D2 son los diámetros transversal y longitudinal 1 cm por debajo del segmento más estrecho, respectivamente. En ausencia de estenosis, ≤ 25%, 26-50%, 51-75%, 76%-90%, 90% hasta obstrucción completa, el grado de estenosis en animales se dividió en 0, 1, 2, 3, 4 , y 5, respectivamente²¹.

Análisis de los datos

El análisis estadístico de los resultados se realizó con el software SPSS 23.0 (IBM Corporation, Armonk, Nueva York, EE. UU.). Se utilizó la prueba exacta de Fisher para comparar las tasas de formación de estenosis entre los grupos. El grado de estenosis se comparó mediante Mann-Whitney. A PAG– valor < 0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Aprobación ética y consentimiento para participar

Obtenido del Comité de Ética Médica del Hospital Lake Dushu en la Universidad de Soochow (220048).